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国家食药监总局公开征求《辣椒制品中苏丹红Ⅰ的快速检测胶体金免疫层析法 (征求意见稿)》食品快速检测方法意见
2018年06月11日
近期,按照《中华人民共和国食品安全法》有关规定,为规范食品快速检测方法使用,食品药品监管总局组织制定了《辣椒制品中苏丹红Ⅰ的快速检测 胶体金免疫层析法(征求意见稿)》食品快速检测方法,已向社会公开征求意见。
1 范围
本方法规定了辣椒制品中苏丹红I的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用辣椒酱、辣椒油、辣椒粉中苏丹红I的快速测定。
2 原理
本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的苏丹红I与胶体金标记的特异性抗体结合,抑制了抗体和检测线(T线)上抗原的结合,从而导致检测线颜色深浅的变化,通过检测线与控制线(C线)颜色深浅比较,对样品中苏丹红I进行定性判定。
3 试剂和材料
除另有规定外,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1 试剂
3.1.1 乙腈。
3.1.2 无水硫酸镁。
3.1.3 正己烷。
3.1.4 二氯甲烷。
3.1.5 氢氧化钠。
3.1.6 氢氧化钠溶液(2mol/L):称取氢氧化钠(3.1.5)8g,用水溶解并稀释至100mL。
3.1.7 无水乙醇。
3.1.8 复溶液:将无水乙醇(3.1.7)与水按照体积比25:75混匀。
3.2 参考物质
苏丹红I参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1,纯度≥95%。
表1 苏丹红I参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量
中文名称 | 英文名称 | CAS登录号 | 分子式 | 相对分子量 |
苏丹红I | Sudan I | 842-07-9 | C16H12N2O | 248.28 |
注:或等同可溯源物质。
3.3 标准溶液的配制
3.3.1 苏丹红I标准储备液(1mg/mL):精密称取苏丹红I参考物质(3.2)适量,置于10mL容量瓶中,加入适量乙腈(3.1.1)超声溶解后,用乙腈稀释至刻度,摇匀,制成浓度为1mg/mL的苏丹红Ⅰ标准储备液。-20 ℃避光保存,有效期6个月。
3.3.2 苏丹红I标准中间液(1μg/mL):精密量取苏丹红I标准储备液(1mg/mL)(3.3.1)100μL,置于100mL容量瓶中,用乙腈(3.1.1)稀释至刻度,摇匀,制成浓度为1μg/mL的苏丹红I标准中间液。
3.4 材料
3.4.1 固相萃取柱:CNW Poly-sery MIP-SDR固相萃取柱(200mg/3mL),或相当者。
3.4.2 苏丹红I胶体金免疫层析试剂盒,适用基质为辣椒酱、辣椒油、辣椒粉。
3.4.2.1 金标微孔。
3.4.2.2 试纸条或检测卡。
4 仪器和设备
4.1 移液器:200μL、1mL和5mL。
4.2 涡旋混合器。
4.3 离心机:转速≥4000r/min。
4.4 电子天平:感量为0.01g。
4.5 氮吹仪。
4.6 水浴锅。
4.7 环境条件:温度15℃~35℃,湿度≤80%。
5 分析步骤
5.1 试样制备
取适量样品,液体样品或半固体样品充分混匀,固体样品充分粉碎混匀。
5.2 试样的提取
5.2.1 辣椒酱
称取辣椒酱2g(精确至0.01g)于15mL离心管中,加入0.5g无水硫酸镁(3.1.2)和5mL正己烷(3.1.3)提取液,涡旋振荡1min后,4000r/min离心5min。将上清液全部加入到固相萃取柱(3.4.1)中,流出液弃去。再加入6mL正己烷淋洗固相萃取柱,流出液弃去。用2mL二氯甲烷(3.1.4)洗脱固相萃取柱,收集洗脱液吹干。精密加入400μL复溶液(3.1.8),涡旋混合1min,作为待测液,立即测定。
5.2.2 辣椒油
称取辣椒油5g(精确至0.01g)于15mL离心管中,加入8mL正己烷(3.1.3)进行提取,涡旋振荡1min后,将上清液全部加入到固相萃取柱中,流出液弃去。再加入6mL正己烷淋洗固相萃取柱,流出液弃去。用2mL二氯甲烷(3.1.4)洗脱固相萃取柱,收集洗脱液吹干。精密加入400μL复溶液(3.1.8),涡旋混合1min,作为待测液,立即测定。